端粒酶活性檢測

端粒酶簡介

端粒酶是一種RNA依賴性DNA聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成，可維持端粒長度（Greider and Blackburn 1989）。端粒酶以自身RNA為模板，合成端粒DNA，從而使細胞獲得無限增殖。其主要由3部分組成，即人端粒酶RNA（humane telomerase RNA component, hTERC）、端粒酶協(xié)同蛋白（humane telomerase associated protein, hTEP1）及端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humane telomerase reverse transcriptase, hTERT），其中hTERT被認為是端粒酶活性表達的關(guān)鍵組分，hTERT編碼的 mRNA 水平與端粒酶整體活性一致。因此，可以用hTERT亞基的mRNA水平基因表達量來衡量端粒酶活性。

端粒酶活性檢測的主要方案

1. 直接檢測法（Trap法）基于端粒酶對端粒酶底物DNA的催化延伸作用，可對端粒酶進行特異性識別，進而實現(xiàn)端粒酶活性的檢測。檢測端粒酶活性的方法主要有端粒重復序列擴增法（TRAP）、端粒重復序列延伸法、比色法、熒光法、表面增強拉曼光譜法等。

2.間接檢測法（熒光定量法）主要是通過檢測端粒酶催化亞基hTERT基因的表達量間接反映端粒酶的活性。hTERT基因表達量與端粒酶活性極顯著相關(guān)，也同時都是重要的腫瘤標志物。催化亞基hTERT基因表達量檢測。

Biowing端粒酶檢測

本 產(chǎn) 品試劑盒采用雙色熒光qPCR   (TaqMan探針法) 檢測端粒酶催化亞基TERT基 因和 內(nèi)參基 因 GAPDH 。通過提取細胞RNA ，利用特異性逆轉(zhuǎn)錄引物進行逆轉(zhuǎn)錄反應， 以cDNA為模板在單管中利用 多重熒光定量PCR進行擴增反應 (雙重探針： FAM 、Cy5) 。選用293T細胞為陽性對照以及MRC- 5細 胞為陰性對照，判斷樣本中是否有TERT基因表達 。該試劑盒具有以下特點：

1 . 靈敏：雙色探針，靈敏度高。                 

2 . 穩(wěn)定：全程閉管操作，無交叉污染。

3 . 可靠：含內(nèi)參基因，避免假陰性。

4 . 方便：操作簡單，無需電泳步驟。

5.  定量： 以CT值判斷，可定量檢測。

結(jié)果展示

 圖 左: 陽性對照的擴增曲線；右: 陰性對照的的擴增曲線

( 藍色為TERT基因曲線, 紅色為內(nèi)參基因曲線)