支原體的生物學(xué)特點(diǎn)和檢測方法

支原體的生物學(xué)特點(diǎn)

支原體（Mycoplasma）支原體是一種原核細(xì)胞病原體，大小是介于細(xì)菌和病毒之間，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形體大小與病毒以及細(xì)菌等病原體有明顯的差異，且能夠在體外獨(dú)立存活，是目前所知能獨(dú)立生活的十分小原核細(xì)胞微生物，缺乏細(xì)胞壁是支原體的顯著特征。1898年Nocard和Roux從患胸膜肺炎的牛體中分離出一種病株，后證實(shí)為支原體。1944年Eaton等人從非典型肺炎患者體內(nèi)分離出一種新的病原微生物，這種微生物后證實(shí)為肺炎支原體。1960年代正式確立支原體屬（Mycoplasma）。

支原體與細(xì)菌和病毒不同，由于其特別的生物學(xué)特性(如缺乏細(xì)胞壁、基因組小等)，在合成及代謝上可能具有與細(xì)菌不同的特點(diǎn)。

支原體與人類疾病的發(fā)生

隨著支原體的研究的日益增多，支原體的生物學(xué)特征越來越被熟知。目前支原體有一百多種，其中肺炎支原體、發(fā)酵支原體、生殖支原體、解脲支原體和人型支原體與人類疾病的發(fā)生關(guān)系密切。

肺炎支原體是引起支原體肺炎的主要病原體。其中大家熟知的肺炎支原體與上呯吸道感染、支原體肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生密切相關(guān)。因?yàn)榉窝字гw不具有細(xì)胞壁，作用于細(xì)胞壁的傳統(tǒng)抗菌藥物對支原體肺炎患者的治療效果相對較差。肺炎支原體與生殖支原體是對人明確有致病作用的支原體。肺炎支原體粘附在宿主呼吸道黏膜上皮上，引起機(jī)體急性呼吸道感染性疾病。生殖支原體粘附在宿主泌尿生殖道上皮上，感染宿主泌尿生殖系統(tǒng)，引起生殖系統(tǒng)疾病。

支原體與細(xì)胞凋亡

支原體作為人類感染性疾病的常見病原體，支原體感染與細(xì)胞凋亡有關(guān)。Sokolova等學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)支原體與淋巴細(xì)胞、上皮來源腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)后，支原體借產(chǎn)生的過量核酸內(nèi)切酶，導(dǎo)致宿主細(xì)胞DNA裂解，增殖停滯，導(dǎo)致培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。細(xì)胞感染支原體后對其他凋亡誘發(fā)的因素，如Fas、TNF-a的敏感性也提高，導(dǎo)致細(xì)胞逐步喪失生命力。支原體感染與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切。

發(fā)酵支原體和豬鼻支原體與人類腫瘤的關(guān)系密切，可通過影響宿主正常和異常細(xì)胞的新陳代謝和增殖分化，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。肺炎支原體與生殖支原體與細(xì)胞凋亡的關(guān)系研究也越來越多，研究已經(jīng)表明，肺炎支原體與生殖支原體感染引起的相關(guān)宿主細(xì)胞凋亡促進(jìn)了疾病的發(fā)生與發(fā)展。

支原體感染的危害

隨著科研和生產(chǎn)的需要，各種細(xì)胞用于疫苗生產(chǎn)、細(xì)胞工程、基因工程日益增多，包括雜交瘤細(xì)胞，傳代細(xì)胞等。然而，支原體的感染是個嚴(yán)重問題。在各種細(xì)胞培養(yǎng)物和疫苗中君可檢測到感染支原體。細(xì)胞被支原體污染后，憑外觀難以發(fā)現(xiàn)。支原體感染后不引起明顯的細(xì)胞形態(tài)改變，也不會導(dǎo)培養(yǎng)液的變化，所以很難被發(fā)現(xiàn)。但是細(xì)胞培養(yǎng)一旦感染支原體，細(xì)胞卻可產(chǎn)生一-系列生物學(xué)變化，包括生長特征、細(xì)胞膜組成、染色體異常、酶系改變和病毒產(chǎn)量變化等。因此，細(xì)胞污染支原體，給科研和生產(chǎn)帶來了嚴(yán)重的失。

除此之外，一些細(xì)胞生物制品也極易感染支原體，如細(xì)胞培養(yǎng)后制備的市售成品疫苗也存在污染支原體問題，影響疫苗的安全性，并且可能會引起支原體的再次傳播。WHO規(guī)定細(xì)胞生產(chǎn)的活疫苗中不能存在支原體污染。

支原體污染的檢測方法

支原體的檢測方法有很多，包括直接法(培養(yǎng)方法)和間接法(如DNA熒光染色法、ELISA、免疫熒光法檢測、電鏡檢査等)。每種檢測方法都有自己的優(yōu)勢，也存在一些不足。如耗時長;不能同時覆蓋多種常見支原體污染，靈敏度低，檢測特異性差等。當(dāng)前大家比較認(rèn)可的檢測方法是，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測方法，特別是熒光定量qPCR的檢測方法受到越來越多的關(guān)注和好評。技術(shù)問世以來，熒光定量qPCR靈敏度高、特異性強(qiáng)，高效快速，節(jié)省了大量的人力和物力。

翼和生物開發(fā)的支原體檢測試劑盒可以檢測120種支原體，涵蓋了大部分的支原體種類。包含兩款試劑盒類型，如快檢支原體試劑盒BPM50和高靈敏檢測試劑盒BPMPro50能夠滿足多種檢測場景的應(yīng)用。BPM50應(yīng)用于快檢場景，BPMPro50則應(yīng)用于支原體的高靈敏檢測場景。具有以下特點(diǎn)：

靈敏：配合高效DNA提取試劑盒，檢測靈敏度達(dá)10

CFU/mL。

穩(wěn)定：全程閉管操作，無交叉污染。

可靠：含內(nèi)參基因，避免假陰性。

方便：操作簡單，無需電泳步驟。

鑒于支原體在環(huán)境中存在，由于 PCR 反應(yīng)非常靈敏，實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)，以免發(fā)生DNA 污染：

建議分區(qū)操作。

A區(qū)：樣本DNA提取，建議在超凈工作臺完成；

B區(qū)：配制mix和qPCR陰性加樣，建議在超凈工作臺完成；

C區(qū)：按照先加待測樣本，后加陽性對照的順序加樣；建議陽性在專門的超凈工作臺加樣；

D區(qū)：qPCR擴(kuò)增檢測。

2.建議在 qPCR 反應(yīng)板上陽性對照的排布應(yīng)遠(yuǎn)離待測樣本和陰性對照；使用不同的移液器添加陽性對照與待測樣本、陰性對照，并使用帶濾芯的槍頭進(jìn)行加樣。