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主營產(chǎn)品:主要技術(shù)服務(wù):細胞STR鑒定;支原體檢測;細胞種屬檢測;端粒長度檢測;端粒酶活性檢測等。
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    RT-PCR方法--端粒酶活性檢測

    發(fā)布時間: 2025-04-24  點擊次數(shù): 365次

    檢測意義

    1、臨床上:觀測是否有腫瘤。

    2、工業(yè)客戶:間接考察細胞是否有成瘤的可能性。

     

    端粒酶活性檢測的主要方案

    1、直接檢測端粒酶(蛋白及RNA的結(jié)合復(fù)合物)的活性,檢測它是否可以延伸DNA模板,然后跑膠或者探針雜交,檢測DNA延伸的長度,以此來判斷端粒酶的活性高低。

    該方法操作較復(fù)雜,靈敏度不高。

     

    2、間接檢測端粒酶(催化亞基的mRNA量)的活性。

    該方法靈敏度高,操作相對簡便。


    YH端粒酶活性檢測原理

    雙色熒光探針分別檢測端粒酶催化亞基TERT基因mRNA和內(nèi)參基因GAPDH mRNA。在進行樣本檢測時,同時檢測陽性細胞293T和陰性MRC-5細胞做為對照,利用??CT法計算樣本中TERT基因的相對表達量。

    檢測所用主要儀器

    熒光定量PCR: Real Time PCR System(ABI 7500,U.S.A)

    RNA質(zhì)控:Nanodrop 2000C Spectrophotometer(Thermo scientific,Germany)

    檢測所用試劑

    RNA抽提試劑盒:RNAiso Plus kit(Code No.9108/9109,TaKaRa,Japan)

    RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒: RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(00820611,Thermo scientific,Germany)

    雙色熒光TERT基因檢測試劑盒:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司自研

    陽性對照:293T細胞

    陰性對照:MRC-5細胞(正常的人胚肺細胞)



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